參與藥物代謝的CYP450酶主要為CYP1、CYP2和CYP3三個(gè)家族,共有7種重要的亞型,分別為CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4。如選用特異的選擇性抑制劑抑制不同亞型的酶的活性,便可研究藥物的酶
代謝表型。
根據(jù)微粒體種屬的不同,可根據(jù)實(shí)際需求選擇人肝微粒體、恒河猴肝微粒體、比格犬肝微粒體、大鼠肝微粒體和小鼠肝微粒體中的一種。需于-70℃冰箱冷凍保存,切記避免反復(fù)凍融。代謝表型試驗(yàn)具體操作如下:
1、試驗(yàn)組:
(1)冰浴融化試劑盒各組分,置于冰上待用;
(2)除微粒體外,將孵育體系其它各組分按照配比混合并吹吸混勻,于37℃預(yù)孵育5min;
(3)將以上混合液195μL/管分裝至1.5mL離心管中,于37℃水浴中保溫,5μL/反應(yīng)加入肝微粒體,吹吸3次混勻于37℃水浴條件下啟動(dòng)代謝反應(yīng),使用秒表計(jì)時(shí);
(4)于設(shè)定孵育時(shí)間點(diǎn),向孵育體系中加入200μL預(yù)冷的乙腈終止反應(yīng)(預(yù)冷乙腈:孵育體系體積=1:1)。
2、對照組:
(1)加陽性底物組:反應(yīng)體系中不加選擇性抑制劑,并將受試物換為陽性底物,其它組分加入量不變,缺少體積用0.1MPBS緩沖液補(bǔ)齊;
(2)無抑制劑組:反應(yīng)體系中不加選擇性抑制劑,其它組分加入量不變,缺少體積用0.1MPBS緩沖液補(bǔ)齊;
(3)無A液、B液組:反應(yīng)體系中不加A液和B液,其它組分加入量不變,缺少體積用0.1MPBS緩沖液補(bǔ)齊。
代謝表型試驗(yàn)注意事項(xiàng):
1、試驗(yàn)開始前,請自行準(zhǔn)備1.5mL離心管、不同規(guī)格槍頭、乙腈、37℃水浴鍋等。
2、僅供科研使用,不能用于人體及動(dòng)物的治療或臨床診斷。
3、使用前,需于冰浴條件下解凍并混合均勻。
4、于-70℃冰箱冷凍保存,切勿反復(fù)凍融。
5、在使用過程中,也可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整各組分的加入量。